Wykorzystanie przeprogramowanych komórek do identyfikacji terapii brodawczaka oddechowego AD 3

Po usunięciu komórek odżywczych zmierzono żywotność komórek płuc za pomocą testu CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability (Promega). W danych wykorzystano sigmoidalną krzywą stężenie-odpowiedź przy użyciu Graphpad Prism, wersja 4.03. Wyniki
Generowanie komórek normalnych i komórek nowotworowych
Rysunek 1. Rysunek 1. Generowanie warunkowo przeprogramowanych komórek z płuc normalnych i nowotworowych. Panel A pokazuje histopatologiczne cechy guza płuca (hematoksylina i eozyna): typowa brodawczakowatość bez oznak dysplazji (góra) i komórki z atypią koilocytozy (dół, strzałki). Panel B podsumowuje protokół eksperymentalny. Panel C pokazuje cechy morfologiczne warunkowo przeprogramowanych komórek nowotworowych płucnych hodowanych z komórkami odżywczymi przez 36 godzin i po kontynuacji proliferacji dla 72 podwojeń populacji. Strzałki po lewej wskazują kolonie komórek izolowane od pacjenta.
Badanie histologiczne próbek chirurgicznie wyciętego guza płuc wykazało brodawczaka z ogniskową atypią koilocytarną, co jest zgodne z rozprzestrzenieniem z poprzednich zmian krtaniowych (Figura 1A). Małe fragmenty guza i przyległa normalna tkanka płucna zostały zdyspergowane w pojedynczych komórkach, a komórki zostały rozmnożone za pomocą nowej techniki hodowli komórkowej.5 8-dniowy cykl czasowy do ustalenia hodowli komórkowych i oceny ekspresji genów HPV i guza -czułość chemosensitivity na komorę pokazano na rysunku 1B. Typowe cechy morfologiczne kolonii nabłonka we wczesnym stadium (1,5 dnia w hodowli) pokazano na Figurze 1C; nie było widocznych różnic morfologicznych pomiędzy prawidłowymi komórkami a komórkami nowotworowymi pochodzącymi od tego pacjenta. Te pierwotne kultury osiągnęły konfluencję w 4 dni. Wzrost normalnych komórek i komórek nowotworowych był również bardzo podobny; komórki były utrzymywane przez ponad 72 podwojenie, jak pokazano na Figurze 1C, w celu weryfikacji ciągłego wzrostu. Hodowle prawidłowych komórek i komórek nowotworowych wykorzystano do analizy molekularnej genomu HPV-11 i do testowania in vitro chemioterapii.
Mutacje genomu HPV-11 i progresja nowotworu
Figura 2. Figura 2. Wykrywanie zmutowanego HPV-11 w nowotworze płuc i pochodnych hodowlach komórek. Panel A pokazuje typowanie wirusa brodawczaka ludzkiego (HPV) w komórkach nowotworu płuc za pomocą testu reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR). DNA wyizolowano z hodowanych komórek nowotworowych i do typowania HPV użyto ogólnego zestawu starterów HPV (MY09 / MY11), jak również specyficznych dla typu zestawów starterów. Tylko startery dla HPV typu 11 (HPV-11) dały oczekiwane produkty PCR, które zostały potwierdzone przez sekwencjonowanie DNA. Panel B pokazuje ekspresję genów HPV w komórkach nowotworowych. Transkrypty informacyjnego RNA (mRNA) E6 i E7 HPV-11, ale nie L1, wykryto w komórkach nowotworowych metodą PCR z odwrotną transkryptazą
[patrz też: vitamarin, terapia uzależnień, forum biolog ]