Wykorzystanie przeprogramowanych komórek do identyfikacji terapii brodawczaka oddechowego AD 2

Żadna z tych terapii nie spowolniła wzrostu guza ani jego progresji do płuc, a torakotomia była wymagana w 1993, 2000 i 2007 roku do wycięcia guzów. W 2010 r. Tomografia komputerowa (CT) wykazała, że istnieje wiele guzków płucnych, które przyspieszyły wzrost, przy czym trzy guzy indeksu powiększyły się o 21%, 72% i 130% w ciągu 11 miesięcy. Na początku tego badania wykonano czwartą torakotomię w celu usunięcia guzów z prawego górnego płata, a pacjenta zaklasyfikowano klinicznie jako mającego chemiooporną, postępującą chorobę. Metody
Izolacja komórek i rozmnażanie
Próbki tkanki normalnej i guza uzyskano po tym, jak pacjent otrzymał pisemną świadomą zgodę zgodnie z protokołem z uczelnianej komisji kontrolnej Uniwersytetu Georgetown University Hospital. Próbki tkanek zdyspergowano w pojedynczych komórkach przez trawienie kolagenazą i trypsyną, a komórki rozmnażano za pomocą nowej techniki hodowli komórkowej 5, która wykorzystuje kokulturę z mysimi komórkami fibroblastowymi J2 i pożywką zawierającą inhibitor kinazy Rho Y-27632 (Enzo Life Sciences). Wykazano, że ta metoda szybko generuje hodowle komórek nabłonkowych, które można namnażać w nieskończoność in vitro. Nowa technika hodowli została opisana w dodatkowym dodatku, dostępnym wraz z pełnym tekstem tego artykułu na stronie.
Izolacja DNA, klonowanie i sekwencjonowanie
Całkowity DNA został wyizolowany z komórek lub tkanek hodowanych przez pacjenta za pomocą zestawu DNeasy Blood and Tissue Kit (Qiagen) i został zamplifikowany przy użyciu zestawu do wzmacniania kół (RCA) (Illustra TempliPhi, GE Healthcare Life Sciences), opisane w dodatkowym dodatku. Produkty trawiono enzymem Hindlll i klonowano do wektora pUC19. Wirusowe genomy sekwencjonowano z dwóch kierunków za pomocą Primer Walking Services (Genewiz).
Wykrywanie wirusowego genomu za pomocą duplikacji
DNA wyizolowano jak opisano powyżej lub z utrwalonych w formalinie, zatopionych w parafinie próbek tkanek przy użyciu zestawu QuickExtract FFPE DNA Extraction Kit (Epicentre). Preparat DNA poddano analizie reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) z użyciem starterów ogólnych HPV-11 do genu L1 lub starterów specyficznych dla duplikacji ukierunkowanych na połączenie regionów E1 (A) i L1 (B). Sekwencje starterów i szczegóły metody PCR podano w Dodatku Uzupełniającym.
Testowanie narkotyków
Komórki izolowane z guza płuc i sąsiadującego normalnego płuca były wysiewane w trzech powtórzeniach z komórkami odżywczymi J2 w 24-studzienkowych płytkach do mikromiareczkowania (BD Falcon) przy 104 komórkach na studzienkę. Dwadzieścia cztery godziny później komórki traktowano nośnikiem (dimetylosulfotlenek), cydofowirem, dihydroartemizininą lub vorinostatem rozpuszczonymi w dimetylosulfotlenku w różnych stężeniach przez 48 godzin.
[przypisy: kamagra bez recepty, papkowaty stolec, forum biolog medycyna ]